葡萄球菌肠毒素B在大肠杆菌中的表达

应用DNA重组技术,构建了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的原核表达载体pET22b( )-SEB,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经终浓度为0．4mmol／LIPTG的诱导作用,可获得分子量约为29KD的表达蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,重组表达的SEB主要以可溶的形式存在于细胞周质中,表达SEB的量约占菌体总蛋白的30％左右。重组表达的SEB经HiTrap^TM chelating HP柱纯化能达到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。ELISA试验表明纯化的重组SEB与抗天然野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。     

抗金葡萄肠毒素B的单克隆抗体的纯化与鉴定

复苏抗金葡萄肠毒素的杂交瘤细胞株２Ｄ１,１Ｄ２,１Ａ３,１Ｇ４,２Ｂ１,经１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基传代扩增,以１＊１０＾６２个细胞／鼠,腹腔注射降植烷自理伯ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,１０天后收集腹水,经快速酶联免疫吸收实验测得腹水抗体效价为１．６＊１０＾－６－３．２＊１０＾－６。     

取代茚酮纯化方法及分析方法研究

合成品5,6-二甲氧基茚酮(以下简称茚酮)是含量不足50％的复杂混合物．设计了两种纯化方法,研究了溶剂萃取的单溶剂、复合溶剂种类、配比、脱色、脱胶剂以及重结晶方法．研究了纯化样品的分离分析方法．最终获得的纯化样品纯度大于98％．     

相思子毒素多克隆抗体研究

制备了相思子毒素的多克隆抗体,并比较了不同纯化方法得到的抗体的活力回收率,研究了抗体对相思子毒素中毒的预防和急救作用。     

相思子毒素和凝集素研究

对我国云南昆明相思子进行了分离纯化及特性研究,相思子经稀酸浸泡,抽提,硫酸铵分级沉淀,酸化Sepharose4B亲和层析,DEAE－Sepharose FF阴离子交换层析,分离到两种毒素成分P1、P2和一种凝集素P3。通过SDS－PAGE测定分子量P1、P2,分别为68Kd、62Kd,P3为129Kd;亚基分子量P1为36Kd、33Kd、31Kd,P2为35Kd、29Kd,P3为39Kd、37Kd、31Kd;P1、P2、P3的等电点分别为6．9、6．2－6．3、5．3;中性糖含量分别为9．4％、3．3％、10．5％;凝集兔红细胞的最小凝集浓度分别为19．0μg/ml、2．5μg/ml、0．3μg/ml;对小鼠腹腔注射LD50分别为25．8μg/ml、2．4μg/ml、1．2mg/kg。