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采用MA104细胞系培养和T载体克隆技术,在轮状病毒结构蛋白VP4基因序列中设计合成引物,经过PCR扩增后将特异性产物与pMD-19-T载体连接,对获得的轮状病毒重组质粒标准品进行酶切鉴定和测序分析。利用常规PCR和荧光定量PCR方法对获得的重组质粒标准品进行特异性和灵敏度指标的检验。结果表明,将构建的重组质粒作为标准品制备标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系(斜率为-4.015,R2=0.991);荧光定量PCR熔解曲线分析表明,85.8℃的PCR产物是轮状病毒VP4基因序列的特异性产物,该标准品具有轮状病毒特异性;同时,所制备的重组质粒标准品在荧光定量PCR检测中具有较大的线性范围(5×101~5×1010拷贝/μL),每个梯度PCR反应最低可以检测到50拷贝的重组质粒,因而采用该标准品进行荧光定量PCR分析具有较高的检测灵敏度;此外,该重组质粒标准品具有较高的稳定性和重复性,3次独立实验的变异因数Cv<1.5%。构建的重组质粒标准品可以用做环境水体中轮状病毒的荧光定量PCR标准品。 相似文献
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简要介绍了近年来关于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)及其突变体的基因位点、基因克隆和表达以及SEB的基因检测方法研究概况。 相似文献
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研究了用KI固体试剂侦检亚当氏气的定性、定量分析方法,研究了反应体系显色条件,并初步探讨了反应机理。该方法一检测限达0.29mg/L。 相似文献
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为满足科研和医学应用上的需要,用基因工程的方法制备海蛇神经毒素。首先人工合成海蛇神经毒素Erabutoxin(Eb)的基因,重组到T载体。通过PCR扩增Eb基因,用限制性内切酶把基因片段酶切成黏性末端,然后将目标基因插入表达载体pPET22b(+),电转重组质粒到宿主菌BL21(DE3),在25℃0.5mmol/L IPTG诱导培养8h收获培养物,SDS-PAGE电泳检测目标蛋白大部分存在于包涵体中,用8mol/L尿素溶解后,利用C末端的His-6与Ni^2+离子亲和层析纯化,得到单一的电泳蛋白带。 相似文献
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建立高度统一、反应灵敏的战略预警系统,是有效对付各种飞机、导弹和航天兵器袭击的首要环节。战略预警系统是国家防御体系的重要组成部分,是防备突然袭击的手段之一,对国家安全有重要意义。对于战略预警系统来说,预警目标的“有无”问题是关键点,是采取后续行动的前提。本文提出了在复杂环境下,基于马尔可夫过程的战略预警系统“目标首次发现”融合检测的三种可能的算法,并进行了初步的仿真比较研究。 相似文献
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对用气相色谱-微波等离子体发射光谱(GC-MIP-AED)测定水中微量路易氏剂的方法进行了研究。路易氏剂或氯乙烯胂酸与2,3-二巯基丙醇反应生成挥发性的衍生物。先选择了衍生化条件,然后在波长为480.192nm,181.379nm和189.042nm处分别检测了衍生物中的氯、硫、砷等元素的发射信号。用此测定方法,检测限为每升水中0.1μg路易氏剂;加标回收率为87.2 ̄97.4%之间,变异系数小于 相似文献
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使用沙保氏平板培养基对储存喷气燃料进行真菌培养,并在沙保氏液体培养基中纯化特征真菌,观察特征真菌菌落及孢子形态,进行形态学初步鉴定。对特征真菌进行18S rDNA测序,将得到的DNA序列在美国国立生物技术信息中心网站上进行比对,最终鉴定储存喷气燃料中的特征真菌为芽枝霉属Amorphotheca resinae真菌。建立起燃料-水-菌落体系,在不同水质量分数、氧气体积分数和温度条件,研究Amorphotheca resinae真菌在燃料中的生长特性,并用颗粒计数器检测不同代谢速度下燃料颗粒污染度的变化。结果表明,较低的水质量分数、氧气体积分数和温度均能抑制Amorphotheca resinae真菌生长,从而抑制由真菌代谢引起的喷气燃料颗粒污染度变化,提高燃料洁净度。 相似文献
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以14Ti+3B4C+5C为基础反应体系,通过热力学分析及静态燃烧合成实验研究了钛含量对该体系SHS反应的绝热温度、反应速度和产物致密度的影响.研究表明,Ti含量适当增加,能够使反应速度加快、产物致密度提高.当Ti过量16%(摩尔分数)时,体系的绝热温度仍高达3 193K,反应速度最快,产物的致密度也较高. 相似文献
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免疫-PCR是1992年建立的抗原检测系统。它将抗原抗体反应特异性与PCR强大的扩增能力结合起来,因而大大提高了灵敏度,具有广泛的应用和发展前景。综述了该系统的原理、方法、应用前景等。 相似文献
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采用(CH3)2SiCl2和N2H4反应产物为先驱体,在H2、NH3气条件下,用化学气相裂解法制备出Si/C/N纳米复合微粉这一全新的合成体系.对温度、气体流量,H2/NH3的比例等合成工艺条件对微粉的性质、形貌、组成等的影响进行了较为系统的讨论,并从热力学和动力学的角度初步讨论了产物裂解机理及组成的变化形成机理.所合成的Si/C/N微粉为无定型球状颗粒,N的含量从16.49%~26.75%可调,粒径最小达40 nm. 相似文献
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用一种单巯基化合物1-巯基丙烷和三种双巯基化合物1,3-二巯基丙烷、2,3-二巯基丙醇、3,4-二巯基甲苯经亲核取代反应将路易氏剂衍生为挥发性较好的二硫砷化合物,用GC-MS鉴定了这些化合物的结构,并讨论了分子离子的碎裂方式及个别碎片的来源. 相似文献
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《海军工程大学学报》2017,(5)
为充分描述海杂波时变特性和局部奇异性,将多重分形消除趋势理论(MFDFA)引入到雷达海杂波特性分析中,理论分析了海杂波的多重分形参数,对比分析了白噪声、单分形和海杂波的广义Hurst指数,并通过仿真进一步分析了实测海杂波数据的多重分形谱、质量指数和广义Hurst指数。结果表明:海杂波具有明显的多重分形特性,且其波动函数具有一定的分布规律。使用该分析方法提取出的海杂波的多重分形特性很好地解释了海杂波的内在非线性特性,比统计特性分析更加确切地描述海杂波的产生机理,为基于多重分形特性的雷达目标检测提供了依据。 相似文献
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金联免疫检测是在快速ELISA检测方法基础上发展起来的更快捷、更灵敏的检测方法,包括斑点免疫金染色、斑点免疫金渗滤、金联免疫层析纸条等。在金联免疫实验的各步骤中,膜片的封闭是实验的关键,如果封闭不佳,会出现非特异性吸附,使阴性样本出现假阳性而影响结果的判断.为了选择最佳封闭条件,我们比较研究了去脂牛奶、牛血白蛋白、酪蛋白、人血清和明胶封闭对金联免疫显色结果的影响。 相似文献
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用14种培养基通过倾注平板计数法、液体培养法和四管培养法对喷气燃料样本中的微生物进行分离培养和鉴定,以探讨喷气燃料中微生物污染的状况,并为探讨纳米抗菌剂对喷气燃料中微生物的杀菌效果提供现场菌种,从而更有效地解决喷气燃料中的微生物污染问题.结果发现,每毫升储存罐底油样本在琼脂培养基上共检测出3 688个菌落,沉淀罐底油样本共检测出4 957个菌落.样本中分离出的细菌主要有法式柠檬酸杆菌、棒状杆菌、麦芽杆菌和葡萄球菌等;真菌主要有青霉菌、木霉菌、曲霉菌和枝孢霉菌等. 相似文献
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在微波辐射无溶剂条件下,苯甲醛、肉桂醛和二苯甲酮分别与苯胺反应合成了3种亚胺类化合物,解决了此类化合物由于不稳定而在柱层析过程中分解的问题,并对产物进行了提纯和1H NMR表征。在辐射功率为400 W、辐射时间为90 s条件下,前2个反应的产率分别为82%和80%,而由于空间位阻的影响,二苯甲酮与苯胺未发生反应。在增大辐射功率、延长辐射时间后,二苯甲酮与苯胺发生反应并取得了56%的产率。 相似文献