葡萄球菌肠毒素B的分子生物学研究进展

简要介绍了近年来关于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)及其突变体的基因位点、基因克隆和表达以及SEB的基因检测方法研究概况。     

葡萄球菌肠毒素B在大肠杆菌中的表达

应用DNA重组技术,构建了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的原核表达载体pET22b( )-SEB,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经终浓度为0．4mmol／LIPTG的诱导作用,可获得分子量约为29KD的表达蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,重组表达的SEB主要以可溶的形式存在于细胞周质中,表达SEB的量约占菌体总蛋白的30％左右。重组表达的SEB经HiTrap^TM chelating HP柱纯化能达到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。ELISA试验表明纯化的重组SEB与抗天然野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。     

直接免疫PCR方法的建立

免疫PCR基本原理与ELISA相似,即用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中酶放大检出信号,建立了直接免疫PCR的检测蓖麻毒素技术,实验结果表明,其灵敏度达1pg／ml,比ELISA方法灵敏度高10^3倍.     

一种高灵敏度标记免疫分析法—免疫PCR

免疫－ＰＣＲ是１９９２年建立的抗原检测系统。它将抗原抗体反应特异性与ＰＣＲ强大的扩增能力结合起来,因而大大提高了灵敏度,具有广泛的应用和发展前景。综述了该系统的原理、方法、应用前景等。