葡萄球菌肠毒素B的分子生物学研究进展

简要介绍了近年来关于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)及其突变体的基因位点、基因克隆和表达以及SEB的基因检测方法研究概况。     

葡萄球菌肠毒素B在大肠杆菌中的表达

应用DNA重组技术,构建了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的原核表达载体pET22b( )-SEB,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经终浓度为0．4mmol／LIPTG的诱导作用,可获得分子量约为29KD的表达蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,重组表达的SEB主要以可溶的形式存在于细胞周质中,表达SEB的量约占菌体总蛋白的30％左右。重组表达的SEB经HiTrap^TM chelating HP柱纯化能达到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。ELISA试验表明纯化的重组SEB与抗天然野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。     

受体生物传感器用于检测有毒物质的可能性

概要介绍了神经受体的性质,神经受体与天然毒素及有机磷毒剂的关系,对受体生物传感器研究中的某些问题进行了讨论,在新的形势下,积极创造条件,跟踪前沿科学,开展用于侦检毒剂毒物的受体生物传感器的研究是值得认真考虑的。     

κ—银环蛇毒素的研究进展

κ-银环蛇毒素(κ-bungarotoxin，κ-BGT)是一种突触后神经毒素，由66个氨基酸残基组成，其结构中含有5个保守的二硫键，能选择性的识别α，β2亚型的神经元烟碱乙酰胆碱受体，与α—BGT有很高的同源性。在原核细胞及真核细胞中克隆表达的κ-BGT均具有一定的生物活性。     

直接免疫PCR方法的建立

免疫PCR基本原理与ELISA相似,即用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中酶放大检出信号,建立了直接免疫PCR的检测蓖麻毒素技术,实验结果表明,其灵敏度达1pg／ml,比ELISA方法灵敏度高10^3倍.     

斑点免疫金染色检测金葡菌肠毒素B封闭条件的研究

金联免疫检测是在快速ELISA检测方法基础上发展起来的更快捷、更灵敏的检测方法,包括斑点免疫金染色、斑点免疫金渗滤、金联免疫层析纸条等。在金联免疫实验的各步骤中,膜片的封闭是实验的关键,如果封闭不佳,会出现非特异性吸附,使阴性样本出现假阳性而影响结果的判断．为了选择最佳封闭条件,我们比较研究了去脂牛奶、牛血白蛋白、酪蛋白、人血清和明胶封闭对金联免疫显色结果的影响。     

箭红气雾剂对N2O4中毒动物的急救效果评价

在完全相同条件下比较小白鼠对N2O4吸入中毒和用气雾剂对中毒小白鼠救治后的LC50值、肺脏器系数、肺体积系数和肺组织的病理变化。结果表明,箭红气雾剂能减低N2O4中毒小白鼠的死亡率及减轻由N2O4中毒所引起的损伤。     

真核表达载体的研究进展及其在防化研究中的应用

真核细胞表达载体在生物技术的许多领域都具有很好的应用前景,尤其在防化研究中的应用受到了各国军界的重视。对目前国内外真核表达载体的构建策略、IRES序列的应用及存在的问题进行了评述,并对其发展趋势进行了探讨。     

β-银环蛇毒素A1链基因的克隆及序列分析

为制备β-BGTA1链重组蛋白并进一步开展β-BGT的生物活性研究,在大肠杆菌中克隆了D—BGTA1链基因,从银环蛇毒腺中提取总RNA,经反转录PCR获得银环蛇毒素cDNA．根据β-BGTA链基因的保守序列设计引物,以银环蛇毒素cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR产物连接到克隆载体pUCm-T,转入层coilTop10感受态细胞中,经蓝白斑筛选,PCR鉴定为阳性克隆后测序．测序证明获得了β-BGTA1链基因．测序获得的D—BGTA1链基因序列与文献报道的D—BGTA1链的基因序列一致．     

乙酰胆碱受体生物传感器的研究概况

烟碱样乙酰胆碱受体对其配体,如毒素、许多化合物、农药、新的生物工程产品等具有高亲和性和选择性,乙酰胆碱受体生物传感器可检测一类物持它的应用,为生物传感器研究提供了一种良好的生物活性材料。近几年来,对神经受体生物传感器的研究比较活跃,本文主要介绍了烟碱样乙胆碱受体生物传感器研究的概况。