葡萄球菌肠毒素B的分子生物学研究进展

简要介绍了近年来关于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)及其突变体的基因位点、基因克隆和表达以及SEB的基因检测方法研究概况。     

葡萄球菌肠毒素B在大肠杆菌中的表达

应用DNA重组技术,构建了金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的原核表达载体pET22b( )-SEB,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经终浓度为0．4mmol／LIPTG的诱导作用,可获得分子量约为29KD的表达蛋白。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,重组表达的SEB主要以可溶的形式存在于细胞周质中,表达SEB的量约占菌体总蛋白的30％左右。重组表达的SEB经HiTrap^TM chelating HP柱纯化能达到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯。ELISA试验表明纯化的重组SEB与抗天然野生型SEB单克隆抗体呈现明显的阳性免疫反应。     

κ—银环蛇毒素的研究进展

κ-银环蛇毒素(κ-bungarotoxin，κ-BGT)是一种突触后神经毒素，由66个氨基酸残基组成，其结构中含有5个保守的二硫键，能选择性的识别α，β2亚型的神经元烟碱乙酰胆碱受体，与α—BGT有很高的同源性。在原核细胞及真核细胞中克隆表达的κ-BGT均具有一定的生物活性。     

相思子毒素的受体特征研究

选择合适的相思子毒素受体结合条件,对相思子毒素和多种动物红细胞的受体结合活性进行了研究,获得了不同种动物红细胞的受体特征参数,并分析了相思子毒素P1、P2,凝集素P3以及蓖麻毒素对^125I-Abrin结合红细胞的竞争抑制作用,4种毒素表现出不同的抑制活性。     

直接免疫PCR方法的建立

免疫PCR基本原理与ELISA相似,即用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中酶放大检出信号,建立了直接免疫PCR的检测蓖麻毒素技术,实验结果表明,其灵敏度达1pg／ml,比ELISA方法灵敏度高10^3倍.     

真核表达载体的研究进展及其在防化研究中的应用

真核细胞表达载体在生物技术的许多领域都具有很好的应用前景,尤其在防化研究中的应用受到了各国军界的重视。对目前国内外真核表达载体的构建策略、IRES序列的应用及存在的问题进行了评述,并对其发展趋势进行了探讨。     

抑制性神经递质受体药理学研究进展

γ—氨基丁酸(GABA)受体是中枢神经系统中主要的抑制性神经递质作用的靶位点，是配体门控离子通道超家族成员之一。简述了GABA受体的分类，重点讨论了国内外有关GABAA受体的结构与功能的关系和与其相互作用的有关化合物，对GABA受体药理学研究的进一步深入，可以为筛选新型的躯体失能剂奠定基础。     

二苯氯肿对F1代仔鼠的行为畸胎毒理学

试验通过二苯氯胂（DA）对哺乳期仔鼠的行为畸胎学研究,观察DA对哺乳期仔鼠的行为发育的影响,以便了解DA的致畸作用和潜在毒性,为制定环境保护标准和采取相应的环保措施提供参考。试验于F0代雌性大白鼠妊娠第15天至哺乳第28天连续ig染毒,剂量分别为1．89、0．94和0．63mg／kg。在试验中,观察F0代孕鼠的一般状态、体重变化及主要脏器有无异常和F1代仔鼠的反射行为、行为活动有无异常。试验结果表明：1．89mg／kg和0．94mg／kg剂量的DA均能显著抑制F0代母鼠体重的增长,对F0代母鼠有毒性作用,1．89mg／kg剂量的DA可使F1代仔鼠迷宫活动的错误比率增加;表明高剂量的DA可对F1代仔鼠的短期记忆产生影响。     

β-银环蛇毒素A1链基因的克隆及序列分析

为制备β-BGTA1链重组蛋白并进一步开展β-BGT的生物活性研究,在大肠杆菌中克隆了D—BGTA1链基因,从银环蛇毒腺中提取总RNA,经反转录PCR获得银环蛇毒素cDNA．根据β-BGTA链基因的保守序列设计引物,以银环蛇毒素cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR产物连接到克隆载体pUCm-T,转入层coilTop10感受态细胞中,经蓝白斑筛选,PCR鉴定为阳性克隆后测序．测序证明获得了β-BGTA1链基因．测序获得的D—BGTA1链基因序列与文献报道的D—BGTA1链的基因序列一致．     

海蛇神经毒素Erabutoxin（Eb）的基因在大肠杆菌中的表达研究

为满足科研和医学应用上的需要,用基因工程的方法制备海蛇神经毒素。首先人工合成海蛇神经毒素Erabutoxin（Eb）的基因,重组到T载体。通过PCR扩增Eb基因,用限制性内切酶把基因片段酶切成黏性末端,然后将目标基因插入表达载体pPET22b（＋）,电转重组质粒到宿主菌BL21（DE3）,在25℃0．5mmol／L IPTG诱导培养8h收获培养物,SDS-PAGE电泳检测目标蛋白大部分存在于包涵体中,用8mol／L尿素溶解后,利用C末端的His-6与Ni^2＋离子亲和层析纯化,得到单一的电泳蛋白带。